產品名稱：胚腎細胞；293T
英文簡稱：293T細胞

貨號：LZ-X968549
規格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4,5-二-2-氨咪唑耐低溫薄層菌拉丁屬名: aureus

4,5-二-2-氨咪唑金黃色葡萄球菌拉丁屬名: Fusarium equiseti

P1,P5-二(腺苷5′)五磷五鈉鹽木賊鐮孢拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

2',3'-二脫氧腺苷釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

2',3'-二脫氧腺苷釀酒酵母注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

2',3'-二脫氧腺苷光帽鱗傘注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

三(2-氨乙)里亞氏須腹菌拉丁屬名: Bacillus  cereus

三(2-氨乙)蠟狀芽孢桿菌拉丁屬名: Angulomicrobium  sp.

三-O-乙酰-D-半乳糖烯角微菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

三-O-乙酰-D-半乳糖烯腐皮鐮孢菌拉丁屬名: Trichoderma longibrachiatum

2-琥珀酐長枝木霉拉丁屬名: sp.

2-琥珀酐鏈球菌(不定種)注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

2-琥珀酐北方蜜環菌拉丁屬名: Bacillus  subtilis

1,10-二溴癸烷枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Talaromyces trachyspermus

1,10-二溴癸烷糙孢籃狀菌拉丁屬名: Escherichia coli

1,10-二溴癸烷大腸埃希氏菌拉丁屬名: Rhizopus stolonifer
293T細胞兔半乳凝集素4(GAL4)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-吡黑曲霉拉丁屬名: Nocardioides terrigena

兔胰腺再生蛋白3α(REG3α)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-吡土生類諾卡氏菌用途: 產生代謝產物具有抑菌活性

兔心肌鈣黏蛋白(H-Cadherin)酶聯免疫吸附測定試劑盒 2-吡鏈霉菌拉丁屬名: Aspergillus  ficuum

兔色素P450家族成員1A1(CYP1A1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 2-氨咪唑硫鹽無花果曲霉用途: 在酒精、白酒、酶法制葡萄糖、異構酶制糖等工業上廣泛應用

兔質金屬蛋白酶-13(MMP-13)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-氨咪唑硫鹽黑曲霉拉丁屬名: Bacillus oceanisediminis

兔低密度脂蛋白受體(LDLR)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-氨咪唑硫鹽海洋沉積物芽孢桿菌拉丁屬名: Debaryomyces hansenii var. hansenii

兔端錨聚合酶2 (TNKS2)酶聯免疫吸附測定試劑盒8-羥喹啉-2-漢遜德巴利酵母漢遜變種拉丁屬名: Rhizopus stolonifer

兔甘露糖受體C2 (MRC2)酶聯免疫吸附測定試劑盒 8-羥喹啉-2-匍枝根霉(黑根霉)拉丁屬名: Streptomyces asparaginoviolaceus

兔甘露聚糖結合凝集素相關絲氨蛋白酶(MASP)酶聯免疫吸附測定試劑盒Dexmedetomidine HCl天門冬素紫色鏈霉菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

兔髓鞘少突膠質糖蛋白(MOG)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Met-Ser褐孢霉菌*拉丁屬名: Candida rugosa

兔結蛋白(Des)酶聯免疫吸附測定試劑盒 苯利扎曲坦皺褶假絲酵母拉丁屬名: Bacillus  sp.

兔激活素A(ACVA)酶聯免疫吸附測定試劑盒四羰二-代合二銠,Rh芽孢桿菌屬拉丁屬名: Geobacillus  stearothermophilus

兔黏著斑激酶(FAK)酶聯免疫吸附測定試劑盒 四羰二-代合二銠,Rh嗜熱脂肪地芽孢桿菌用途: 教學科研，用于研究鄰苯二酚1,2-雙加氧酶因

兔羧肽酶E(CPE)酶聯免疫吸附測定試劑盒4-正丁苯大腸桿菌拉丁屬名: Arthrobacter paraffineus

兔巨噬激蛋白(MSP)酶聯免疫吸附測定試劑盒4-正丁苯石蠟節桿菌拉丁屬名: Hafnia alvei

兔尿微量白蛋白(MAU)酶聯免疫吸附測定試劑盒2-吡啶酰肼蜂房哈夫尼菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae